{"id":5621,"date":"2023-10-14T21:52:04","date_gmt":"2023-10-15T01:52:04","guid":{"rendered":"https:\/\/cooprinforma.cl\/?p=5621"},"modified":"2023-10-25T22:29:45","modified_gmt":"2023-10-26T02:29:45","slug":"deteccion-de-agentes-infecciosos-en-bovinos-de-lecheria-utilizando-la-tecnica-de-pcr","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/cooprinforma.cl\/index.php\/2023\/10\/14\/deteccion-de-agentes-infecciosos-en-bovinos-de-lecheria-utilizando-la-tecnica-de-pcr\/","title":{"rendered":"Detecci\u00f3n de agentes infecciosos en bovinos  de lecher\u00eda utilizando  la t\u00e9cnica de PCR"},"content":{"rendered":"\t\t<div data-elementor-type=\"wp-post\" data-elementor-id=\"5621\" class=\"elementor elementor-5621\">\n\t\t\t\t\t\t\t\t\t<section class=\"elementor-section elementor-top-section elementor-element elementor-element-5e7f84f elementor-section-boxed elementor-section-height-default elementor-section-height-default\" data-id=\"5e7f84f\" data-element_type=\"section\">\n\t\t\t\t\t\t<div class=\"elementor-container elementor-column-gap-default\">\n\t\t\t\t\t<div class=\"elementor-column elementor-col-66 elementor-top-column elementor-element elementor-element-174df91\" data-id=\"174df91\" data-element_type=\"column\">\n\t\t\t<div class=\"elementor-widget-wrap elementor-element-populated\">\n\t\t\t\t\t\t\t\t<div class=\"elementor-element elementor-element-82f2439 elementor-widget elementor-widget-text-editor\" data-id=\"82f2439\" data-element_type=\"widget\" data-widget_type=\"text-editor.default\">\n\t\t\t\t<div class=\"elementor-widget-container\">\n\t\t\t<style>\/*! elementor - v3.13.3 - 28-05-2023 *\/\n.elementor-widget-text-editor.elementor-drop-cap-view-stacked .elementor-drop-cap{background-color:#69727d;color:#fff}.elementor-widget-text-editor.elementor-drop-cap-view-framed .elementor-drop-cap{color:#69727d;border:3px solid;background-color:transparent}.elementor-widget-text-editor:not(.elementor-drop-cap-view-default) .elementor-drop-cap{margin-top:8px}.elementor-widget-text-editor:not(.elementor-drop-cap-view-default) .elementor-drop-cap-letter{width:1em;height:1em}.elementor-widget-text-editor .elementor-drop-cap{float:left;text-align:center;line-height:1;font-size:50px}.elementor-widget-text-editor .elementor-drop-cap-letter{display:inline-block}<\/style>\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t<div class=\"elementor-element elementor-element-5b24dd9 elementor-widget__width-initial elementor-widget elementor-widget-text-editor\" data-id=\"5b24dd9\" data-element_type=\"widget\" data-widget_type=\"text-editor.default\">\n\t\t\t\t<div class=\"elementor-widget-container\">\n\t\t\t\t\t\t\t<p><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" class=\"alignnone size-full wp-image-5623\" src=\"https:\/\/cooprinforma.cl\/wp-content\/uploads\/2023\/10\/portada.jpg\" alt=\"\" width=\"1586\" height=\"1268\" srcset=\"https:\/\/cooprinforma.cl\/wp-content\/uploads\/2023\/10\/portada.jpg 1586w, https:\/\/cooprinforma.cl\/wp-content\/uploads\/2023\/10\/portada-300x240.jpg 300w, https:\/\/cooprinforma.cl\/wp-content\/uploads\/2023\/10\/portada-1024x819.jpg 1024w, https:\/\/cooprinforma.cl\/wp-content\/uploads\/2023\/10\/portada-768x614.jpg 768w, https:\/\/cooprinforma.cl\/wp-content\/uploads\/2023\/10\/portada-1536x1228.jpg 1536w\" sizes=\"auto, (max-width: 1586px) 100vw, 1586px\" \/><\/p><p><b>Miguel A. Salgado Alfaro<\/b><br \/>Profesor Titular, MSc, Dr. Cs. Med.Vet<br \/>Laboratorio de Enfermedades Infecciosas, Instituto de Medicina Preventiva Veterinaria, Facultad de Ciencias Veterinarias<br \/>Universidad Austral de Chile<br \/>miguelsalgado@uach.cl<\/p><p>Para contextualizar el contenido del presente art\u00edculo de extensi\u00f3n, es preciso definir primero el concepto diagn\u00f3stico. Su origen etimol\u00f3gico proviene del griego\u00a0diagnostik\u00f3s\u00a0\u201cdistintivo, que permite distinguir\u201d, derivado de\u00a0diagign\u00f3skein\u00a0\u201cdistinguir, discernir\u201d y este de\u00a0gign\u00f3skein\u00a0\u201cconocer\u201d. Las caracter\u00edsticas que se le solicitan al diagn\u00f3stico es que debe ser sensible, espec\u00edfico, de bajo costo y r\u00e1pido. Su prop\u00f3sito es para hacer tamizaje, confirmaci\u00f3n, control, certificaci\u00f3n o pre-compra. Lo anterior se debe hacer con la prueba adecuada, para el prop\u00f3sito adecuado, en el momento adecuado y por el precio adecuado, por lo que para cumplir con lo anterior, el diagn\u00f3stico debe tener una base robusta en la ciencia, pero su aplicaci\u00f3n algunos la consideran un arte.<\/p><p><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" class=\"alignnone size-full wp-image-5624\" src=\"https:\/\/cooprinforma.cl\/wp-content\/uploads\/2023\/10\/grafico.png\" alt=\"\" width=\"906\" height=\"544\" srcset=\"https:\/\/cooprinforma.cl\/wp-content\/uploads\/2023\/10\/grafico.png 906w, https:\/\/cooprinforma.cl\/wp-content\/uploads\/2023\/10\/grafico-300x180.png 300w, https:\/\/cooprinforma.cl\/wp-content\/uploads\/2023\/10\/grafico-768x461.png 768w\" sizes=\"auto, (max-width: 906px) 100vw, 906px\" \/><\/p><p>La primera aproximaci\u00f3n a un buen diagn\u00f3stico es primero entender que las pruebas diagn\u00f3sticas se categorizan en aquellas directas y otras indirectas. Las primeras tienen por objetivo la identificaci\u00f3n directa del microrganismo pat\u00f3geno y\/o partes de este, ej: cultivo, PCR, tinciones. En cambio, las pruebas diagn\u00f3sticas indirectas hacen evidente la respuesta inmune en contra del pat\u00f3geno, ya sea por la v\u00eda humoral o celular. La problem\u00e1tica que se plantea al m\u00e9dico veterinario de terreno es que existe una gran variedad de agentes pat\u00f3genos. Es esencial tener un m\u00e9todo de diagn\u00f3stico espec\u00edfico y sensible para una identificaci\u00f3n r\u00e1pida y precisa de los pat\u00f3genos. Existe una variedad de pruebas de laboratorio, incluyendo cultivo y pruebas moleculares. Todos los m\u00e9todos tienen sus beneficios y limitaciones con respecto a sensibilidad, especificidad, valores predictivos, velocidad y costos.<\/p><p>El diagn\u00f3stico de referencia en enfermedades infecciosas es el cultivo, entre cuyas ventajas destaca el aislar microorganismos viables, a partir de una muestra cl\u00ednica o ambiental, es f\u00e1cil para cuantificar c\u00e9lulas en una muestra y posee alta sensibilidad usando el medio apropiado. Sin embargo, como desventajas est\u00e1n su f\u00e1cil riesgo de contaminaci\u00f3n, se necesita alto nivel de capacitaci\u00f3n para obtener resultados \u00f3ptimos, se requiere tiempo y recursos, y se basa en la caracterizaci\u00f3n fenot\u00edpica y bioqu\u00edmica de los pat\u00f3genos. Por lo anterior, se ha hecho necesario un sistema diagn\u00f3stico que se sobreponga a las limitaciones del cultivo, que entregue resultados en un tiempo prudente, altamente espec\u00edfico y con un costo apropiado.<\/p><p>Dentro de las t\u00e9cnicas diagn\u00f3sticas, la Reacci\u00f3n en Cadena de la Polimerasa (PCR, del ingl\u00e9s polymerase chain reaction) es la que mayor difusi\u00f3n ha tenido tanto en salud humana como animal, y aparece como una respuesta efectiva y eficiente frente a estas neesidades. La PCR es un medio para amplificar selectivamente un segmento particular de ADN. Se puede considerar como una fotocopiadora molecular. B\u00e1sicamente, se amplifica in vitro un fragmento de ADN espec\u00edfico. <br \/>Para esto se utilizan dos cebadores o partidores de oligonucle\u00f3tidos. \u00c9stos son complementarios a las hebras opuestas de un ADN de doble hebra, y se precisa de una enzima ADN polimerasa (Taq \u2013polimerasa), que se caracteriza por ser termoresistente y ser producida por una bacteria llamada Thermophilus aquaticus.<\/p><p>PRINCIPIO DE LA PCR: existen tres etapas b\u00e1sicas las que son comunes para todo tipo de PCR: 1) denaturaci\u00f3n t\u00e9rmica: los ADNs son denaturadas por temperatura cerca de 94\u02daC y se producen hebras simples de ADNs. 2) anillado de los cebadores : los cebadores (\u201cprimers\u201d) son adjuntados a la hebra simple (ssDNA) por su complementariedad. 3) extensi\u00f3n o polimerizaci\u00f3n: que lo realiza la Taq polimerasa.<\/p><p>Mullis y Faloona, obtuvieron el premio Nobel en 1983, por la s\u00edntesis espec\u00edfica de ADN in vitro a trav\u00e9s de una reacci\u00f3n en cadena catalizada por polimerasa. En la actualidad, existen diferentes variantes de la PCR; convencional, en tiempo real o cuantitativa, PCR digital, etc.<\/p><p>Los beneficios de la PCR son en tiempo: es un diagn\u00f3stico m\u00e1s r\u00e1pido lo que permite desarrollar m\u00e1s r\u00e1pidamente un plan de acci\u00f3n. Confirmaci\u00f3n: con alta especificidad, confirma identidad gen\u00f3mica del microoganismo pat\u00f3geno, en cultivo o directo desde la muestra. Detecci\u00f3n de infecci\u00f3n subcl\u00ednica: permite identificar y eliminar aquellos animales con infecciones subcl\u00ednicas persistentes, que contin\u00faan infectando a otros miembros del reba\u00f1o. Exactitud diagn\u00f3stica: los resultados de PCR son muy confiables con un resultado positivo o negativo de alta precisi\u00f3n con bajos niveles de resultados falsos positivos o falsos negativos.<\/p><p>En la actualidad, la PCR en una herramienta central en las actividades humanas, participando no s\u00f3lo en el diagn\u00f3stico molecular de enfermedades, sino que ha permitido personalizar la medicina, ha sido clave en los estudios de evoluci\u00f3n humana, es de primera necesidad en medicina forense, esencial en el desarrollo de la agr\u00edcultura y en los estudios gen\u00f3micos.<\/p><p>En cuanto a las aplicaciones de la t\u00e9cnica de PCR en medicina veterinaria, especialmente en la salud de reba\u00f1os bovinos de lecher\u00eda, podemos decir que la aplicaci\u00f3n de la PCR para la identificaci\u00f3n de pat\u00f3genos primarios responsables de cuadros como paratuberculosis, leptospirosis, tuberculosis y\/o coxiellosis, su aplicaci\u00f3n ha representado un gran beneficio diagn\u00f3stico. El desafio se presenta cuando se debe hacer diagn\u00f3stico de enfermedades compuestas por m\u00faltiples agentes, en donde muchos de ellos son pat\u00f3genos secundarios u oportunistas y que incluso forman parte de las comunidades microbianas de ciertos tejidos en los animales. Ejemplo de lo anterior, son el complejo respiratorias bovino (ERB), la diarrea en terneros y la mastitis bovina. La alta sensibilidad de las pruebas moleculares es tal que los resultados positivos deben ser cuidadosamente considerados con respecto a su validez. Como ejemplo de lo anterior, no siempre un resultado positivo a E. coli, Mannheimia haemolytica o Mycoplasma spp. significa necesariamente causalidad en cuadros de diarrea de terneros, neumonia y\/o mastitis subcl\u00ednica en bovinos y el alcance de ese resultado debe ser manejado con mucho cuidado teniendo presente lo siguiente:<\/p><p>\u00ab\u00bfTiene sentido el resultado desde el punto de vista biol\u00f3gico?\u00bb para la mejor decisi\u00f3n en base a un criterio infectol\u00f3gico, se debe tener presente aspectos de la biolog\u00eda de las infecciones, tales como histor\u00eda, epidemiolog\u00eda, signolog\u00eda, ambiente y presencia de factores estresantes. Y en cuanto a la microbiolog\u00eda, se debe analizar m\u00e1s que la presencia de un microorganismo \u201cpotencialmente\u201d pat\u00f3geno, la cuantificaci\u00f3n o estimaci\u00f3n de la carga bacteriana en la muestra cl\u00ednica obtenida del animal.<\/p>\t\t\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t\t<\/div>\n\t\t<\/div>\n\t\t\t\t<div class=\"elementor-column elementor-col-33 elementor-top-column elementor-element elementor-element-1e29238\" data-id=\"1e29238\" data-element_type=\"column\">\n\t\t\t<div class=\"elementor-widget-wrap elementor-element-populated\">\n\t\t\t\t\t\t\t\t<div class=\"elementor-element elementor-element-0dd2a09 elementor-widget elementor-widget-text-editor\" data-id=\"0dd2a09\" data-element_type=\"widget\" data-widget_type=\"text-editor.default\">\n\t\t\t\t<div class=\"elementor-widget-container\">\n\t\t\t\t\t\t\t<a href=\"https:\/\/cooprinforma.cl\/index.php\/ediciones\/\"><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" class=\"alignnone wp-image-5566 size-full\" src=\"https:\/\/cooprinforma.cl\/wp-content\/uploads\/2023\/10\/banner_179.jpg\" alt=\"\" width=\"300\" height=\"250\" \/><\/a>\n\n<a href=\"https:\/\/aegnutricionanimal.cl\/rumimax\/\" target=\"_blank\" rel=\"noopener\"><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" class=\"alignnone wp-image-4604 size-full\" src=\"https:\/\/cooprinforma.cl\/wp-content\/uploads\/2023\/06\/C1.jpg\" alt=\"\" width=\"300\" height=\"250\" \/><\/a><a href=\"http:\/\/www.sqmc.cl\" target=\"_blank\" rel=\"noopener\"><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" class=\"wp-image-5709 size-full\" src=\"https:\/\/cooprinforma.cl\/wp-content\/uploads\/2023\/10\/Captura-de-pantalla-2023-10-18-a-las-22.53.51.jpg\" alt=\"\" width=\"300\" height=\"252\" \/><\/a>\n<img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" class=\"alignnone wp-image-5713 size-full\" src=\"https:\/\/cooprinforma.cl\/wp-content\/uploads\/gif\/syg.gif\" alt=\"\" width=\"300\" height=\"250\" \/>\t\t\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t\t<\/div>\n\t\t<\/div>\n\t\t\t\t\t\t\t<\/div>\n\t\t<\/section>\n\t\t\t\t\t\t\t<\/div>\n\t\t","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Miguel A. 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